DNA complementar
Referência : Moreira, C., (2014) DNA complementar, Rev. Ciência Elem., V2(1):097
Autor: Catarina Moreira
Editor: José Feijó
DOI: [http://doi.org/10.24927/rce2014.097]
O DNA complementar (cDNA do inglês complementary DNA) é DNA sintetizado a partir de um molde de mRNA maduro (isto é, molécula só com exões, após terem sido removidos os intrões) numa reacção catalisada por duas enzimas, a Transcriptase Reversa e a polimerase do DNA.
O cDNA é utilizado para clonar genes de eucariontes em procariontes. Isto porque os procariontes não têm maturação do RNA logo fariam a redução de todo o DNA. Por exemplo, para expressar uma determinada proteína numa célula onde geralmente não é expressa (expressão heteróloga), transfere-se cDNA que codifica a proteína para a célula alvo. O cDNA também pode ser produzido por retrovírus, que o utilizam como mecanismo de infecção.
Síntese de cDNA numa célula eucariótica:
O método mais utilizado é a partir de mRNA maduro catalisado pela enzima Transcriptase reversa. A enzima actua no mRNA de cadeia simples gerando uma cadeia de DNA complementar.
- o DNA é transcrito em mRNA
- o mRNA sofre maturação e são removidos os intrões, e adicionados uma poli-A à extremidade 5’ e um grupo metil-guanina extremidade 5’
- as várias moléculas de mRNA maduro são extraídas da célula
- adiciona-se transcriptase reversa e nucleótidos, e a síntese do cDNA propriamente dita é iniciada
- para sintetizar cadeias de DNA adicionais é necessário digerir a cadeia de RNA usando a enzima RNase A
- após a digestão do RNA, o DNA de cadeia simples (CSDNA) enrola dado que as cadeias simples de ácidos nucleicos têm propriedades hidrofóbicas.
Figura 1. Síntese de cDNA
O cDNA pode ser utilizado para criar bibliotecas de cDNA, que são arquivos das sequências dos mRNAs de uma dada célula ou organismo. Tendo a informação de uma biblioteca de cDNA para um organismo permite cloná-lo noutro organismo, o que é de extrema importância para reproduzir, por exemplo, proteínas importantes para os humanos em espécies não humanas.
Figura 2. Construção de uma biblioteca de cDNA
Referências:
http://en.wikipedia.org/wiki/Complementary_DNA
Criada em 07 de Julho de 2011
Revista em 02 de Agosto de 2011
Aceite pelo editor em 05 de Janeiro de 2012
