Mostrar código-fonte de PCR

<span style="font-size:8pt"><b>Referência : </b> Moreira, C., (2014) PCR, ''[http://rce.casadasciencias.org Rev. Ciência Elem.]'', V2(4):243
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<span style="font-size:8pt"><b>Autor</b>: <i>[[Usuário:Catmor|Catarina Moreira]]</i></span><br>
<span style="font-size:8pt"><b>Editor</b>: <i>[http://www.cbmg.umd.edu/faculty/josfeij José Feijó]</i></span><br>
<span style="font-size:8pt"><b>DOI</b>: <i>[[http://doi.org/10.24927/rce2014.243 http://doi.org/10.24927/rce2014.243]]</i></span><br>
<html><a href="https://rce.casadasciencias.org/rceapp/static/docs/artigos/2014-243.pdf" target="_blank">
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'''Reacção em cadeia da polimerase''' (do inglês, ''Polymerase Chain Reaction'', '''PCR''') é uma técnica que permite obter, ''in vitro'', várias cópias de uma molécula de DNA. 

Esta técnica foi desenvolvida por Kary Mullis em 1983 e veio revolucionar a genética molecular. Actualmente a PCR é utilizada na clonagem de DNA, sequenciação de DNA, diagnóstico de doenças hereditárias, etc. O método baseia-se num ciclo térmico em repetido de subidas e descidas da temperatura da reacção de desnaturação do DNA e replicação do DNA por acção enzimática. 

A técnica surge com a descoberta de enzimas – '''DNA polimerases''' – que não desnaturam a temperaturas elevadas à volta dos 90ºC. Uma das mais conhecidas é a '''Taq polimerase''' inicialmente isolada das bactérias termófilas ''Thermus aquaticus'', que vive em fontes termais a elevadas temperaturas. 

O PCR ocorre em ciclos, e em cada ciclo decorrem as seguintes fases (Fig. 1): 
<br> 

#a molécula original de DNA é desnaturada (isto é, as duas cadeias separam-se) a temperaturas muito elevadas na ordem dos 96ºC, que quebram as ligações de hidrogénio entre as bases complementares das duas cadeias. 
#os primers (pequenos fragmentos de DNA, com sequências específicas de nucleótidos, que marcam os limites do fragmento de DNA a replicar) emparelham com a cadeia de DNA, no local específico onde a sequencia de nucleótidos do primer é complementar da cadeia molde. Esta fase ocorre a uma temperatura mais baixa ( em média perto dos 55ºC). 
#a síntese de DNA ocorre a 72ºC, com o auxílio da enzima DNA polimerase e de desoxirribonucleótidos presentes na solução de reacção, prosseguindo a ligação dos nucleótidos à cadeia de DNA molde.

No final do primeiro ciclo há uma duplicação de número de moléculas de DNA, e seguem-se mais ciclos, duplicando-se em cada um deles o número de moléculas de DNA. O fragmento amplificado ao longo dos vários ciclos terá o tamanho delimitado pelos ''primers''. 

<br> [[Image:PCR.jpg|500px]] 

'''Figura 1.''' Esquema de um Ciclo de PCR 

1. Desnaturação a 96ºC 2. Emparelhamento dos primers (Temperatura mais baixa) 3. Elongamento (síntese de DNA com auxílio da DNA polimerase a 72ºC) Ao primeiro ciclo esquematizado na imagem seguem-se mais ciclos em número variável. As duas cadeias de DNA resultantes servem de molde para o ciclo seguinte, resultando numa duplicação da quantidade DNA duplicado em cada ciclo. 


<youtube v="_YgXcJ4n-kQ" />

'''Vídeo 1.''' PCR (em inglês) 


'''Palavra chave:''' enzima, DNA, polimerase
[[Category:Biologia]]

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---- <br>Criada em 07 de Julho de 2011<br> Revista em 29 de Agosto de 2011<br> Aceite pelo editor em 05 de Janeiro de 2012<br>